普通引物合成

普通引物合成

服务介绍

普通引物是指在PCR反应中作为引导DNA扩增的引物,通常由18-25个碱基组成,可以与目标DNA序列特异性结合,并提供DNA聚合酶催化合成新DNA链所需的3'端。普通引物通常用于常规PCR反应中,包括基因表达分析、病原体检测、基因型鉴定等应用。普通引物的合成和设计非常常见和标准化,通常可以在引物库中找到现成的引物,也可以根据需要定制合成,具有成本低、操作简便等优点。引物合成可用于PCR、测序、全基因合成、亚克隆、点突变、载体构建、RNA干扰和基因重组等实验。根据不同的用途,可选择不同的纯化方式。

服务优势

先进:采用世界上先进的合成仪制造商BLP 公司生产的nm级别的Dr.oligo192高通量DNA合成仪,使引物合成更快速、更安全、更稳定;

快速:3h内可以合成192条30个碱基以内的引物;常规RPC、DSL、OPC纯化引物24h内发货,武汉地区次日即可交付;

安全:采用气相氨解的原理,改进的氨解方式,可以在90min内使引物氨解的更快更完全,并且避免由于其他试剂氨解带来的不必要的突变;

优质:多种纯化方式,多重质量检测手段(HPLC、MS),全面保证我们发货的质量。

服务流程 •订单接收 •合 成 •纯 化 •质 检 •分 装 •质 检 •发 货

客户提供

引物合成订购表:需详细填写客户信息、序列、碱基数、纯化方式等信息。

最终交付

对应合成量的引物冻干粉;

引物操作说明书。

服务说明

纯化方式

引物长度

产量(OD)

发货时间

RPC纯化

8-15nt

1月2日

1工作日

2月4日

1工作日

15-59nt

1月4日

1工作日

5月10日

1工作日

10月15日

1工作日

15-20

1工作日

>20

1工作日

60-120nt

1月2日

3工作日

2-5

3工作日

>5

3工作日

PAGE纯化

15-59nt

1月2日

3工作日

3月4日

3工作日

5月8日

3工作日

>8

3工作日

60-80nt

1-2

3工作日

3月4日

3工作日

5月8日

3工作日

>8

3工作日

80-100nt

3

3工作日

3

3工作日

3

3工作日

>8

3工作日

100-120nt

1

3工作日

2

3工作日

HPLC纯化

8-15nt

1月2日

3-5工作日

3月4日

3-5工作日

15-59nt

1月4日

3-5工作日

5月8日

3-5工作日

相关技术服务

定点突变

亚克隆/载体构建

DNA测序

基因合成

双荧光素酶报告系统

相关资源

1、引物合成实验中的专属名词及解释

● Oligo(Oligonucleotide):Oligo是指短链的寡聚核苷酸,通常由20到200个碱基组成。在引物合成实验中,引物往往是一种特定长度的oligo。

● 反向合成(Reverse Synthesis):在引物合成实验中,反向合成指从3'端到5'端逐个加入核苷酸单元,合成引物的过程。

● 脱保护(Deprotection):在引物合成中,引物的核苷酸单元通常被保护基团保护,以防止在反应过程中发生意外的化学反应。脱保护是指去除这些保护基团的过程,使得引物的核苷酸单元可用于进一步的化学反应。

● HPLC(High-Performance Liquid Chromatography):高效液相色谱法,一种常用的分离和纯化技术,可用于分离和纯化合成的引物。

2、引物的保存与使用注意事项

● 引物保存的注意事项:

▶ 储存温度:将引物储存在干燥的条件下,通常在-20°C或更低的温度下。避免频繁的冻融循环,因为这可能导致引物的降解。

▶ 避光保护:引物应储存在避光的条件下,以防止光照引发的降解反应。使用不透明的冷冻管或管盒来保护引物。

▶ 防潮防湿:确保引物储存环境干燥,避免湿气的进入。可以使用干燥剂或密封性良好的储存容器来防止湿气侵入。

● 引物使用的注意事项:

▶ 引物质量控制:在使用引物之前,进行引物的质量控制验证,如测序确认引物序列的准确性或质谱分析验证纯度。

▶ 合理稀释:根据实验需求,合理稀释引物至适当的工作浓度。确保稀释过程中的准确度和标记清晰度。

▶ 正确温度:在实验中,根据引物的要求和扩增反应的最佳温度,严格控制反应温度。避免超过引物的最大耐受温度。

▶ 避免污染:使用无菌技术和无菌操作条件,避免引物受到外源性的污染。使用专用的无菌技术器材和操作区域。

▶ 单次使用:为避免引物的降解和污染,一次性使用所需量的引物,并避免重复冻融。

3、引物合成的实验举例 ● PCR(聚合酶链式反应):PCR是一种常用的基因扩增技术,引物在PCR反应中用于选择性地扩增目标DNA序列。

● 实时定量PCR(qPCR):qPCR用于准确测量目标DNA或RNA的数量,引物在qPCR实验中用于扩增目标序列并进行定量分析。

● DNA测序:引物在DNA测序中用于扩增待测序列的片段,以便进行测序反应。

● RNA pull-down:RNA pull-down实验用于研究RNA与蛋白质的相互作用。引物在该实验中用于捕获目标RNA分子,并与其结合的蛋白质一起纯化和分析。

● 基因突变分析:引物在基因突变分析中用于扩增目标基因的特定区域,以便进行突变检测和分析。

● 基因克隆:引物在基因克隆中用于扩增目标基因的特定区域,以便将其插入到表达载体或矢量中。

● 限制性片段长度多态性(RFLP)分析:引物在RFLP分析中用于扩增目标基因的特定区域,以便进行限制性酶切并分析不同基因型的片段长度差异。

4、用于引物合成设计、分析和操作的在线工具简介 ● Primer3 :Primer3常用的在线引物设计工具,可以根据用户提供的目标序列信息,自动设计适合的引物序列,并提供引物参数和特性分析。(primer3.ut.ee)

● IDT SciTools :IDT SciTools提供了多个在线工具,包括引物设计、引物分析、序列优化和酶切位点分析等。其中包括了引物设计、Tm值计算、二聚体结构预测等功能。(idtdna.com/pages/tools)

● OligoAnalyzer:OligoAnalyzer是IDT提供的在线工具,用于分析引物的理化特性,包括Tm值、二聚体结构、GC含量、末端稳定性等。(idtdna.com/pages/tools/oligoanalyzer)

● NCBI Primer-BLAST:NCBI Primer-BLAST是由国家生物技术信息中心(NCBI)提供的在线工具,用于引物设计和特异性分析。它可以设计引物,并对其在基因组中的特异性进行评估。(ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/)

● UCSC In-Silico PCR:UCSC In-Silico PCR是UCSC基因组浏览器提供的在线工具,可以通过输入引物序列,在基因组上进行虚拟PCR,并可视化PCR产物的位置。(genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgPcr)

● SnapGene:SnapGene是一款商业软件,提供了在线版本和桌面版本。它可以用于引物设计、序列编辑、限制性酶切模拟和克隆操作等。在线版本允许用户进行一些基本的引物设计和序列分析操作。(snapgene.com)

金开瑞-提供核酸和蛋白的整体研究方案:

武汉金开瑞生物工程有限公司是一家专业致力于为全球制药企业、诊断试剂企业、科研试剂研发企业、高校和科研院所以及大型医院提供蛋白及相关研究技术服务的高新技术企业。金开瑞极其注重平台技术提升,现已有多项自主知识产权和软件著作权专利,并已通过ISO9001质量管理体系认证,2018获批“千企万人”支持计划。公司以“细胞外囊泡”研究中心、基础生物医学实验中心、蛋白抗体中心和分子生物学中心为依托,提供核酸和蛋白的整体研究方案,与众多科研单位携手开展了大量的探索项目。截止到目前,已支持客户发表科研论文达1000+篇,累计影响因子6000+。

检测分析平台——免疫学、细胞系、分子生物学检测、双荧光素酶报告基因; 基因服务平台——引物合成、基因合成、DNA提取、载体构建、定点突变; 分子互作研究平台——双萤光素酶报告系统、RNA pull down、RIP/RIP-seq、EMSA等; 蛋白表达平台——提供从基因合成到蛋白表达的一站式服务; 抗体定制平台——单/多克隆抗体、人源化抗体、基因工程抗体、双特异性抗体、修饰抗体、诊断抗体、小分子抗体、抗体对、噬菌体服务。 更多服务内容及优惠活动,详见公司主页:http://www.genecreate.cn/

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